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腾氏水产商务网独家报道：北方鲤鱼养殖因KHVD损失惨重，陈昌福整理日本对鲤疱疹病毒病检测防控，求扩散！
最近这种疾病很严重，已经让北方许多养殖鲤鱼的人破产，但是，我送了许多具有典型症状的病鱼给深圳、广州、武汉的相关检测单位，结果都是阴性！我不好说他们的方法有错，我只能说根据症状判定这是属于KHVD是应该没有问题的。我将日本人关于这种疾病的检测与防治方法整理了一下，烦请您通过什么方式尽快地告诉相关人员吧。谢谢！我现在出发去沈阳了。
——陈昌福
年8月6日
最近几年，在我国辽宁、河南、河北等地人工养殖鲤和锦鲤出现了症状与鲤疱疹病毒病（KHVD）及其相似的疾病，因为对发病鱼尚无良好的治疗方法，一旦发病死亡量极大，已经给我国的鲤养殖业造成了极大的威胁。在发病现场采集具有明显症状的病鱼，送到相关检测单位对锦鲤疱疹病毒（KHV）进行病原检测时，而大量的检测结果却为阴性。
这里将日本学者报道的对鲤疱疹病毒病的监测、防控方法做简要介绍，谨供相关检测技术人员和鲤养殖业者参考。
1鲤疱症病毒病（KHVD）的检测程序日本从上世纪70年代开始对鲤疱疹病毒病实施全国性检测，检测程序如表1。
表1鲤疱症病毒病（KHVD）的检测程序
2流行病学调查内容与结果（1）宿主范围：鲤（Cyprinuscarpiocarpio）和锦鲤（Cyprinuscarpiokoi）。
（2）流行范围：以色列、欧洲诸国、美国、印度尼西亚、泰国、菲律宾、台湾、日本。
（3）这种疾病在水温在20~25℃流行。
（4）由确认由该疾病流行地域引进的鱼类，或者与引进的这些鱼类有过接触的其他鱼类。
（5）从已经确认发生过这种疾病的养殖场引进的鱼类，或者是与这些鱼类发生过接触后引进的鱼类。
（6）养殖场的饲养用水，与上述④或者⑤中养殖场有关联，或者混入了这些养殖场的饲养用水。
3现场检查内容（1）行为观察：游动缓慢，平衡能力失调，病鱼出现异常游动现象。
（2）外部病症检查：最为典型的病变是鳃丝褪色、糜烂、出现巢状坏死、鳃小片尖端外露。此外，体表黏液增多、鳃丝基部有淤血及出血、眼球内陷。
（3）体表组织镜检：鳃上常可发现鱼波豆虫（Ichthyobodo）、车轮虫（Trichodina）等原生动物，还可能发现由柱状黄杆菌（Flavobacteriumcolumnare）等细菌引起的二次感染。
4剖检观察病状虽然没有特征性的病变出现，但是，常见有内脏出现坏死的现象。
病鱼鳃部严重充血
病鱼鳃部有烂鳃症状。可以见到车轮虫等寄生虫，并能分离到柱状黄杆菌等致病菌。病鱼眼球内陷
5诊断方法1初步诊断方法：①PCR检查
材料：从鳃、肾脏和脾脏中提取DNA。
引物：
KHVSphI-5F：5’-GACACCACATCTGCAAGGAG-3’
KHVSphI-5R：5’-GACACATGTTACAATGGTGGC-3’
扩增产物的大小为bp。
反应：94℃30秒、接着94℃30秒、63℃30秒、72℃30秒，40个循环，最后，在72℃条件下7分钟。
②LAMP法
材料：从鳃、肾脏和脾脏中提取DNA。
引物：
KHV-FIP：5’-CCCAAACCCAAGAAGCAGAAACCCGTTGCCTGTAGCATAGAAGA-3’
KHV-BIP：5’-CACTCCCTCCGATGGAGTGAAACTGCCCATGTGCAACTTTG-3’
KHV-F3：5’-CTGTATGCCCGAGAGTGC-3’
KHV-B3：5’-AACTCCATCGCCGTCATG-3’
KHV-LF：5’-CCCGCCGCCGCA-3’
反应：65℃、60分钟。
判定：根据反应液是否发生白浊现象，利用浊度计或者肉眼进行判定。
2确诊方法：通过细胞培养进行病毒检查或者PCR检查。①通过细胞培养方法检查病毒
使用细胞：KF-1细胞。
接种材料：鳃、肾脏、脾脏等脏器匀浆液。
培养温度：20℃。
CPE：细胞出现严重空泡化。
②PCR检查
在初步诊断方法中PCR的基础上，实施以下检查：
材料：鳃、肾脏、脾脏中提取的DNA。
引物：
KHV9/5F：5’-GACGACGCCGGAGACCTTGTG-3’
KHV9/5R：5’-CACAAGTTCAGTCTGTTCCTCAAC-3’
扩增产物的大小为bp。
反应：95℃5分钟、接着94℃1分钟、68℃1分钟、72℃60秒，39个循环，最后，在72℃条件下7分钟。
6病理组织学检查最主要的病理变化特点是鳃上皮细胞增生、肥大而且出现散在的巢状坏死。需要特别注意的是，虽然鳃等组织的细胞核出现着色较深和弱嗜酸性核内包涵体，但是，以此为诊断依据还是有误诊的危险的。
7类似疾病检查由于这种疾病具有鳃丝糜烂、坏死，鳃部出现细菌、真菌和原生动物二次感染的情形是比较多见的，特别是容易与柱形病的临床症状相混淆，而且与柱形病发生的混合感染病例还比较多见。因此，当出现成鱼发生高死亡率，而且怀疑其疾病症状类似鲤疱疹病毒病的话，就应该采用PCR方法进行诊断。
8消毒剂及其消毒方法1饲养用水和排水的消毒①杀菌
紫外线μW·sec/cm2。
②杀菌的方法
采用15W的紫外线灯管每秒能杀灭1.0L饲养用水中的细菌。
在进水处的上端安装紫外线等照射饲养用水。
水深在5.0cm以下，从紫外灯管中心到水体底部10.0cm。
③注意
注意紫外灯管的寿命，及时更换。
对于混浊水、悬浮物质过多的养殖水体会对紫外线杀菌效果造成一定的影响，应该首先采用沉淀水槽等清除其中的杂质后再行消毒。
因为紫外灯很容易产生透射现象，要避免投过水面的紫外线对操作者的危害。
紫外线操作人员要特别注意避免其对眼睛的伤害。
2养殖池的消毒①消毒剂
氯制剂.0ppm（高含量漂白粉、亚氯酸钠溶液）。
②消毒方法
消毒时间为30分钟~1小时。
水深10.0cm~20.0cm，采用氯制剂泼洒，使水体中的药物浓度达到.0ppm。
对于固体氯制剂，要首先溶于水后再泼洒。
池塘埂周边，要采用浓度为.0ppm的氯制剂溶液遍洒。
③注意
氯制剂对皮肤的刺激和腐蚀性均比较强，因此，在消毒操作的过程中，操作者必须带好口罩、手套、眼睛和适宜的劳保服，尤其需要避免将药物溅到身上。
丢弃消毒液废液时，必须在适宜的容器内中和以后再排水。可以采用市售检查管道水用的专用试纸，进行排放标准确认。
在经过消毒后的池塘中，可以直接向池塘中注入地下水。但是，一定不能再注入可能已经受到病毒污染的河水，或者养鱼池排放的水以及从正在养殖的池塘中进水。
3养殖后排水的消毒①消毒剂
氯制剂3.0ppm（高含量漂白粉、亚氯酸钠溶液）。
②消毒方法
消毒时间为30分钟~1小时。
向排水中泼洒上述消毒剂，并且充分搅拌水体。考虑到养殖后的水体中可能存在大量的有机物质需要消耗大量的氯制剂，所以，要将消毒剂的药物浓度达到15.0ppm为宜。
③注意
氯制剂对皮肤的刺激和腐蚀性比较强，因此，在消毒操作过程中，操作者必须带好口罩、手套、眼睛和适宜的劳保服，避免将药物溅到身上。
丢弃消毒液废液时，必须在适宜的容器内中和以后再排水。可以采用市售检查管道水用的专用试纸，进行排放标准确认。
4养殖工具等的消毒①消毒剂
0.1%的氯苄烷铵（逆性石碱）。
氯制剂.0ppm（高含量漂白粉、亚氯酸钠溶液）
②消毒方法
将养殖工具等充分地浸泡在消毒液中。
将经过消毒后的养殖工具用清水充分清洗后，干燥。
③注意
注意及时更换消毒液。
由于手等接触氯苄烷铵溶液导致消毒液污染后，消毒效果就可能消失。
·氯制剂如果没有氯气的气味后，说明消毒作用已经消失。
5手指及小型实验用具消毒①消毒剂
0.1%的氯苄烷铵（逆性石碱）。
70%的酒精。
②消毒方法
将手指、小型实验用具等充分地浸泡在消毒液中。
将经过消毒后的手和小型实验具用清水充分清洗后，干燥。
③注意
注意及时更换消毒液。
采用酒精消毒时，可以采用喷雾法，也可以获得良好的消毒效果。
由于手等接触氯苄烷铵溶液导致消毒液污染后，消毒效果可能消失，要及早更换。
9其他为便于养殖业者能更清楚地掌握各种消毒剂的使用方法，研究者还制定了如表2一样的明白纸。
表2对鲤疱疹病毒病消毒处理方法简表
根据（鱼病研究，第40卷第3号、~）为基础整理而成。
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